было изучение внутриклеточного метаболизма НФ у лиц с метаболическим синдромом без ишемической болезни сердца (ИБС) в зависимости от риска развития СД.

Обследовано 77 мужчин в возрасте от 29 до 61 года (средний возраст 47±7,4 года). Для исключения ИБС всем пациентам выполнялась электрокардиография (ЭКГ), велоэргометрия, холтеровское мониторирование ЭКГ, эхокардиография. С целью диагностики метаболического синдрома использовались критерии экспертов Международной федерации диабета при участии Американского национального института сердца, легких и крови (2009) [3]. Пациенты с СД исключались из исследования. Метаболический синдром был выявлен у 62 (80,5%) обследованных пациентов. У лиц с метаболическим синдромом 10-летний риск развития СД оценивался по тесту-опроснику “FINDRISK” экспертов общества эндокринологов Финляндии. Высокий 10-летний риск развития СД (общее количество баллов ≥15) наблюдался у 31 (50%) пациента с метаболическим синдромом. Для диагностики степени общего ожирения рассчитывался индекс массы тела (ИМТ). Ожирение встречалось у 59 (76,6%) обследованных пациентов, из них у 38 (64,4%) выявлялась I степень ожирения (ИМТ 30–34,9 кг/м2), у 15 (25,4%) – II степень ожирения (ИМТ 35–39,9 кг/м2), у 6 (10,2%) пациентов – III степень ожирения (ИМТ≥40 кг/м2). 

Материалом для исследования являлась периферическая кровь, анализ которой осуществляли при поступлении больных в стационар. НФ выделяли из гепаринизированной крови в двойном градиенте плотности фиколла-верографина 1,077 и 1,092 г/мл. Для исследования брали клетки второй интерфазы, которую составляли НФ на 95%. Количество НФ в клеточной суспензии подсчитывали в камере Горяева с использованием прижизненной окраски раствором метиленового синего в 3% уксусной кислоте (краска Тюрка) для определения жизнеспособных клеток. Жизнеспособность фагоцитов, оцениваемая по трипановому тесту, составляла более 90%. Для достижения концентрации 5×106 НФ в 1 мл клеточную суспензию разводили средой 199.

Для изучения активности НАД(Ф)H-оксидазы в НФ использовался тест спонтанного и стимулированного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), который проводили количественным спектрофотометрическим методом по T.A. Gentle и R.A. Thompson с использованием 0,2% раствора нитросинего тетразолия на фосфатном буфере с рН 7,2, фиксацией клеток метанолом и растворением восстановленного диформазана в смеси 2М калия гидроксида и диметилсульфоксида 3:5 по объему [4].

Активность миелопероксидазы изучали с использованием 0,04% раствора ортофенилендиамина на фосфатном буфере с рН 5,0 с добавлением 0,33% раствора перекиси водорода в соотношении 20:1 по объему. Реакцию останавливали через 10 минут 10% раствором серной кислоты. Бланкировка проходила по раствору ортофенилендиамина и серной кислоты в тех же соотношениях, но без клеточного лизата. Фотометрию проводили при λ=492 нм. Калибровочные растворы изготавливались разведением стандартной пероксидазы хрена (“Sigma Chemical”, США) в фосфатном буфере с рН 5,0 от 0,1 до 100 Ед Sigma/мл [5].

Определение пероксида водорода в НФ проводилось количественным спектрофотометрическим методом по A. Pick и Y. Keisari с использованием 0,2% раствора фенолового красного. Метод основан на способности перекиси водорода взаимодействовать с феноловым красным с образованием неидентифицированного продукта. После инкубации в течение 60 минут при температуре 37°С реакцию останавливали добавлением 1М раствором NaOH. Интенсивность окраски измеряли при λ=600 нм против контрольной пробы, в которой реакция была остановлена сразу после добавления красителя [6].

Определение активности каталазы в НФ основывалось на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Реакцию запускали добавлением 0,03% раствора перекиси водорода. В холостую пробу вместо лизата НФ вносили дистиллированную воду. Реакцию останавливали через 10 минут добавлением 4% раствора молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряли при λ=410 нм против контрольной пробы с дистиллированной водой [7].

Все пациенты подписали информированное соглашение на участие в исследовании.

Статистическую обработку данных проводили с помощью параметрических и непараметрических методов, используя пакет Statistica 5.5 (StatSoft, Inc., USA). Данные исследований представлены в виде их средних значений и стандартного отклонения (M±SD). Различия между группами считались статистически значимыми при р<0,05. 

Пациенты с высоким 10-летним риском развития СД, по сравнению с остальными лицами с метаболическим синдромом, были достоверно старше (49,3±8>44,5±6,1 года; р=0,01) и имели более высокий уровень глюкозы капиллярной крови (5,6±0,5>4,7±0,4 ммоль/л; р=0,0001). При изучении внутриклеточного метаболизма НФ выявлено, что у данных пациентов были выше активность миелопероксидазы (13,8±15,5>5,8±5,5 Sigma Units; р=0,008) и содержание пероксида водорода (52,7±24,2>45,8±22,5 единиц оптической плотности; р=0,08) в фагоцитах (см. рис. 1 и 2). Также у пациентов с высоким риском развития СД был выше ИМТ (34,5±5,1>32,5±3,9 кг/м2; р=0,09). 

Изучение внутриклеточного метаболизма НФ при метаболическом синдроме позволило обнаружить, что его изменения обусловлены наличием у пациентов общего ожирения. У пациентов с ожирением III степени, по сравнению с другими лицами, наблюдалось увеличение активности миелопероксидазы (13,7±10,5>9,1±11,5 Sigma Units) и содержание пероксида водорода (50,1±22,9>46,7±23,9 единиц оптической плотности) в НФ. Рост кислородзависимого метаболизма НФ у пациентов с выраженным ожирением (см. рис. 3) сопровождался достоверным снижением внутриклеточной активности каталазы (156,9±155,1<304,2±119,8 мкат/л; р=0,005). У пациентов с высоким риском развития СД между индексом массы тела и активностью каталазы в НФ выявлялась достоверная отрицательная корреляция (r=-0,54; p<0,05). 

Главным аргументом повышенного интереса к метаболическому синдрому, одним из критериев которого считается ожирение, является его связь с атеросклерозом и риском развития сердечно-сосудистых заболеваний. Выявлено, что ожирение и гипергликемия коррелируют с патологоанатомическими находками атеросклеротических бляшек в коронарных артериях и брюшной аорте у молодых людей в возрасте 15–34 лет [8]. Показано, что наличие метаболического синдрома сопровождается ростом уровня в крови провоспалительных цитокинов, образующихся, вероятно, в жировой ткани и стимулирующих образование С-реактивного белка, рост содержания которого увеличивает риск появления ИБС. При этом известно, что С-реактивный белок усиливает подвижность лейкоцитов, инициирует фагоцитоз и связывание комплемента, стимулирует экспрессию молекул адгезии на поверхности эндотелия [9, 10]. В последние годы показана важная роль активных форм кислорода в развитии осложнений и появлении сердечно-сосудистых событий у больных СД [11]. Ранее доказана связь активации кислородзависимого метаболизма НФ с развитием неблагоприятного исхода у больных ИБС [12]. 

В данном исследовании выявлено, что увеличение риска развития СД у пациентов с метаболическим синдромом сопровождается ростом кислородзависимого метаболизма НФ, активация которого ассоциируется с ожирением. Обнаружено, что у пациентов с высоким 10-летним риском развития СД увеличивается в НФ активность миелопероксидазы и содержание пероксида водорода, которые способны к образованию фермент-субстратного комплекса. Наиболее цитотоксичными продуктами системы миелопероксидазы являются гипохлорная кислота и гипохлорит-анион, которым принадлежит основная антимикробная функция НФ. Пероксид водорода и гипохлорная кислота, хотя и не являются свободными радикалами, способны разлагаться с образованием реакционноспособного гидроксил-радикала, являющегося основным повреждающим агентом в биологических системах [13]. 

Выявлено, что повышенный отдаленный сердечно-сосудистый риск, как и риск смерти от всех причин, отмечается в основном в случаях выраженного ожирения [14]. В настоящем исследовании у пациентов с ожирением III степени рост содержания пероксида водорода в НФ наблюдался на фоне значительного снижения внутриклеточной активности антиоксидантной защиты. Ранее показано, что уменьшение антиоксидантной защиты в НФ сопровождается увеличением риска наступления летального исхода при ИБС [15]. Можно полагать, что «провоспалительное» состояние, наблюдаемое при метаболическом синдроме, обладает способностью провоцировать нестабильность атеросклеротической бляшки и тем самым предрасполагать к развитию сердечно-сосудистых событий.

Увеличение риска развития СД у пациентов с метаболическим синдромом сопровождается ростом кислородзависимого метаболизма НФ, активация которого на фоне снижения антиоксидантной защиты в фагоцитах ассоциирована с ожирением.

Авторы декларируют отсутствие двойственности (конфликта) интересов связанных с рукописью.